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    淺談藥品微生物檢測準確性的影響因素

    發布時間: 2019-08-09  點擊次數: 3549次

    藥品微生物檢測項目是藥品質量控制的重要組成部分,影響藥品微生物檢測結果準確性的因素有很多,人員、儀器設備、使

    用的試劑/培養基/菌種、檢測方法、檢測環境等,本文主要針對藥品微生物的檢驗過程中,對影響檢測準確性的相關因素展開討論

    分析,建立科學合理的質量控制程序,避免由于檢測誤差而造成藥品的不正確評價

     

     

    1 前言

    藥品質量直接關系到人民用藥的安全性和有效性, 而藥品在生產過程中易受微生物的污染, 對微生物的控制和檢測, 是藥品生產過程中重要的環節, 良好的微生物檢測能夠客觀準確反映出藥品中各種微生物的含量, 藥品是否已經受到微生物的污染。

     

    2 藥品中微生物的特點及檢測意義

    藥品中微生物污染的不均一, 且又具有可變性, 使得客觀呈現產品的真實情況變得困難, 給檢測工作帶來更高的挑戰;同時, 檢測過程對微生物有著重大的影響, 鑒于這些原因, 獲得微生物的準確結果, 控制藥品微生物檢測過程中的影響因素變得尤為重要。

    如果藥品受到微生物的污染, 產生有害代謝產物, 引起藥品的變質, 造成人體感染、中毒或致敏反應, 嚴重時會造成患者的生命安全, 同時也會給藥品的生產造成極大阻力, 企業名聲受損, 不利于藥品企業發展。因此, 對藥品微生物進行準確科學地檢測是至關重要的。

     

    3 影響藥品微生物檢測準確性的關鍵因素

     

    3.1樣品

    選擇專業科學的抽樣方案是微生物檢測的基礎, 抽取的樣品應能夠反映整體樣本的實際情況。因產品中受微生物污染的不均一性, 故抽樣方案應進行風險評估, 要保證取得的樣品包含微生物污染風險大的產品, 如進行無菌檢測的樣品, 應包括無菌灌裝的初和終的樣品, 以降低產品質量風險;取樣過程也是易被微生物污染的過程,防止取樣過程中的污染和交叉污染, 取樣環境應得到控制, 接觸藥品的取樣工具、樣品容器等應經過滅菌處理;品在儲存過程中, 也能改變微生物的活性, 應在適宜的條件存放。總之, 采集到有代表性的樣品是檢測準確性的前題。

     

    3.2 培養基

    檢測微生物為關鍵的環節之一是培養基制備, 培養基是微生物生長的營養物, 培養基的性能與檢測結果直接相關。每種微生物生長繁殖都有適宜成份和pH 值, 培養基成份和pH 值的改變直接影響微生物的存活。在配制培養基時, 應用稀鹽酸或稀氫氧化鈉小心地調節pH 值, 使滅菌后的pH 在要求范圍內。

    培養基滅菌結束, 應馬上從滅菌柜中取出, 避免培養基焦化而顏色變深;使用培養基時, 不能直接用電爐加熱融化, 也不能多次加熱融化, 培養基中的氨基酸、糖分等營養成份會被破壞, 影響培養基的質量, 會對實驗結果造成21% 的誤差;培養基在貯存過程中應防止水分流失, 瓊脂培養基不能在低于0℃的條件下保存, 影響凝膠特性;

    培養基的注皿量為十五毫升左右, 厚度為四毫米, 不易過薄過厚, 太薄容易造成水分流失, 太厚會造成培養基中氧含量不足, 抑制需氧菌的生長。

     

    3.3 標準菌株

    微生物檢測時, 使用的對照菌株必須選擇標準菌株, 且可溯源至國內或國外菌種保藏機構。實驗室在保存和使用過程中, 應觀察標準菌株是否出現形態變異、耐藥性變異等, 應減少污染和保持菌種的生物特征穩定典型。藥品微生物檢測實驗中常用的對照菌為無芽孢桿菌, 存活時間較短, 用生理鹽水- 蛋白胨緩沖液配置不同濃度的菌液,菌株在三天之后活菌數量會下降40%, 五天之后下降70%, 故規范、統一的操作程序來控制菌株制備和使用是微生物檢測結果一致性的重要保證。

     

    3.4 供試液制備

    供試液勻質方式和條件在很大程度上會影響檢測結果, 供試液中如果有菌, 則分散充分之后菌落生產數就更多。此外, 供試液分散度不同還會影響供試液的pH 值, 從而影響微生物的生長, 造成實驗測試結果偏差。應用合理的方法進行供試液的制備, 保證供試液均勻分散, 且不改變樣品中原有微生物數量和種類, 這是供試液制備的先決條件。

     

    3.5 結果觀察與計數

    藥品微生物檢測時如果細菌生長的小且密集, 則容易出現肉眼偏差, 計數發生失誤。在菌落計數過程中, 可以適當借助低倍顯微鏡或者放大鏡來觀察, 避免將小氣泡、培養基沉淀物以及藥渣當做菌落給計數上去。計數過程需要小心謹慎, 如果難以區別, 可以按照實際情況適當延長培養時間, 在菌落生長的更大、更明晰之后再行觀察和計數。

     

    3.6 人員資質

    藥品微生物檢測的整個操作過程, 必須嚴格遵守無菌操作。現如今, 檢測人員專業素質不高, 不能正確進行結果觀察和判斷, 是藥品微生物檢測的大風險。微生物檢測人員應選擇有專業背景, 受過相關專業知識培訓, 特別在潔凈更衣、清潔消毒、培養基制備、鏡檢、菌種傳代、菌落計數和結果判斷等操作步驟上, 需要對檢測人員進行實操培訓及資質確認, 在具備微生物檢測能力后, 才可上崗操作。

     

    3.7 環境控制

    在藥品的微生物檢測中, 先進的硬件設施及的實驗室環境是檢測結果準確的保障。因此, 應當加強實驗室環境設施的建設, 注意人流物流及檢測流程的順暢, 避免潔凈物品與培養廢棄物的交叉。潔凈級別滿足檢測要求,陽性實驗室的空調系統獨立設計, 定期對潔凈環境進行懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及溫濕度、壓差等監測, 定期趨勢分析, 并對環境菌作鑒定, 建立環境菌庫。當實驗結果出現偏差時, 可進行相關的微生物溯源分析。

     

    3.8 儀器設備

    微生物檢測的主要儀器設備有滅菌器、超凈臺、生物安全柜、培養箱等, 定期進行性能確認和維保, 確保設備處于良好的工作狀態。培養溫度對實驗結果有著直接的影響, 對培養箱定期進行溫度分布驗證是*的, 驗證的溫度要求應與培養的溫度相一致;物品、培養基等的無菌性是通過滅菌設備的滅菌效果來保證的, 滅菌器性能間接影響著檢測準確性。滅菌器性能確認除進行溫度分布確認外, 還需進行裝載熱穿透測試、微生物挑戰性測試,且當用于培養基滅菌時, 應進行小及大裝載的熱穿透測試, 確認培養基的無菌性和適用性結果, 以保證培養基的滅菌效果與培養基的性能。故實驗室儀器設備的規范管理, 是保證檢測結果準確性的重要因素。

     

    3.9 檢測方法

    微生物檢測方法與檢測結果直接相關, 由于某些供試品具有抑菌活性, 必須對供試品的抑菌活性及測定方法的可靠性進行驗證, 如果使用了表面活性劑、中和劑或滅活劑, 除證明其有效性外, 還需證明對微生物無毒性。當檢測方法發生變化, 可能會影響檢測結果時, 應重新進行方法驗證。科學合理的微生物檢測技術是提高檢測結果的準確性和檢測效率的基礎。

     

    4 結束語

    藥品微生物檢測是保證藥品安全性和可靠性的重要手段, 在藥品生產和使用過程中有著*的作用。本文通過對藥品微生物檢測意義以及檢測特點的簡單介紹, 引出了影響藥物品檢測準確性的主要因素以及相關的改進方法, 希望能夠促進藥品微生物檢測更加、準確, 并為相關藥品檢測工作提供一定的參考。
     

     

    本文來自浙江昌海制藥有限公司 章滿君

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