產品名稱：大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for Escherichia coli O157:H7

產品編號與包裝規格：

產品簡介：本試劑盒基于環介導的恒溫擴增技術（Loop-mediated isothermal amplification，LAMP），用于食品中大腸桿菌O157:H7 的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結果。

檢測原理：利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的 Bst DNA 聚合酶，使模板兩端引物結合處循環出現環狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現在恒溫條件下（60-65℃）進行連續快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。

產品特點：
      1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在 1 h 內完成；
      2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性；
      3. 靈敏度高：最-低檢驗限達到 29 CFU/Test；
      4. 判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒產品組分：

儲存條件與保質期：2~8℃條件下儲存，有效期為12個月。

適用儀器：
      1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
      2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

樣品富集：
      1. 樣品前處理：取 25 g 待檢樣品置于 225 mL 改良 EC肉湯中，前增菌 10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP 快速檢測。
      2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
      3. 待測樣品存放：粗提的待檢 DNA 樣品保存于-4~0℃，不應該超過 24 h；利用試劑盒提取的 DNA 樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。

恒溫熒光法核酸快速檢測試劑盒操作流程

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒使用指南：

1，樣品前處理

   A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
         a) 在檢測食品中大腸桿菌 O157:H7 時，吸增菌液 1 mL到 1.5 mL 規格的無菌離心管中，6000 r/min 離心5 min，棄上清，用50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次，6000 r/min 離心 5 min，完-全去除上清；
         b) 加入 30 μL 裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱 10 min；
         c) 12000 r/min 離心 15 min，上清即為粗提的 DNA，可轉移至 0.2 mL 無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。

   B. 可疑菌落模板 DNA 的制備：挑取可疑菌落，懸浮到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟 b)、c)操作。

2，陰、陽性對照和干粉試劑復溶

   A. 陰、陽性對照復溶：首-次使用時，加入 80 μL 超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
   B. 干粉試劑復溶：取出凍干粉試劑，按照需求剪取 n 個檢測試劑管（n=待檢測樣品數+1 管陽性對照+1 管陰性對照），每管加入 20 μL 復溶液，完-全溶解后待用。

3，擴增反應
   A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到 64℃待用；
   B. 向上述已加入復溶液的 n 個反應管中各加入顯色指示劑 2.5 μL；
   C. 向上述已加入復溶液的 n 個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各 2.5 μL，蓋緊蓋子；
   D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中，反應 50 min。

4，結果判讀：反應結束后，建議在自然光線充足的環境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。

恒溫熒光法核酸快速檢測試劑盒靈敏度對比

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法)用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測。

大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法)用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測。